milieux

est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer le milieu ONPG, j'ai rien compris du tout. et me re-expliqué vite fait l'utilisation du glucose et du lactose dans le milieu de Kligler!
merki

Pour le milieu ONPG, je en sais pas si tu parles de la cupule ONPG contenue dans une galerie API 20E ou d'un milieu en tube donc je ne préfère pas t'induire en erreur.

Pour le Kligler, sache qu'il contient 10g de lactose par litre et 1 g de glucose par L de milieu Kligler.
La cellule étant comme vous, elle ne veut pas se fatiguer!

1 - Donc elle va d'abord utiliser le glucose car elle a l'équipement enzymatique tout de suite opérationnel et disponible.
2 - Mais comme il y a très peu de glucose dans le milieu Kligler, elle sera obligée de fabriquer des enzymes qui n'apparaîssent pas quand il n'y a pas de lactose à utiliser. Parmi elles, il y a la Béta galactosidase qui va permettre la dégradation du lactose en galactose + glucose.

Donc cette enzyme n'apparaît que s'il n'y a plus de glucose dans le milieu et s'il y a du lactose ou un dérivé (comme l'ONPG qui sera dégradé en ONP coloré en jaune).

J'epsère t'avoir aidé!

pourquoi on lit le lactose sur la pente et le glucose dans le culot? c'est ça que j'arrive pas à comprendre en fait!
pour le mileu ONPG, je parlais du mileu en tube (lorsque l'on met 1 disque ONPG dans une suspension bactérienne).

vivi a écrit:pourquoi on lit le lactose sur la pente et le glucose dans le culot? c'est ça que j'arrive pas à comprendre en fait!
pour le mileu ONPG, je parlais du mileu en tube (lorsque l'on met 1 disque ONPG dans une suspension bactérienne).

Kligler-Hajna - MEDITATION SUR CE QUE J' EN COMPRENDS...

Le caractère glucose se lit sur le culot. Au fait, comme disait MM Berthommier, il y a utilisation du glucose en premier car présence des enzymes nécessaire à sa dégradation. Au fait, la dégradation du glucose se fait dans tout le tube au départ: tout est jaune si glucose +

MAIS quand le gluc est utilisé (c'est rapide il y en a que 1g/L)
si la bactérie peut utiliser le lactose, (elle a synthétisée les enzymes nécessaires), elle le fait sur la pente, pour plusieurs raisons:
- la pente est en aérobiose (en contact avec le dioxygène)
- il y a beaucoup de colonies déposées sur la pente, du à l'ensemencement un peu particulier du milieu en stries+piqure.
Si lactose + => Déchets acides de produits => virage DE LA PENTE au jaune.


Si la bactérie étaient glucose + et lactose -:
au départ de l'incubation, tout le tube est jaune (car utilisation glucose): gluc+
Et quand il n'y a plus de glucose, utilisation des peptones sur la pente et revirage de la pente... AU ROUGE
D'ou culot jaune, pente rouge => un ONPG est nécessaire


ONPG pour les bactéries lactose -

Deux enzymes sont nécessaires pour que la cellule dégrade le lactose (en galactose et en glucose):
1) la b-galactosidase, à l'intérieur de la cellule, qui dégrade le lactose
2) la galactoside-perméase, qui est dans la membrane de la cellule et qui permet le passage du lactose dans la cellule pour qu'il y soit dégradé par la première enzyme...

Quand une bactérie est lactose -, cela s'explique de plusieurs facons:
a) la bactérie possède une b-galactosidase (1), mais n'a pas l'enzyme (2) qui permet le passage du lactose: donc pas de dégradation du lactose
b) l'inverse: elle possède l'enzyme 2 qui permet au lactose de rentrer, mais il n'y a pas de galactosidase, donc pas de dégradation
c) aucune des deux... donc pas de dégradation, c'est clair.

Dans le test ONPG en tube, on utilise le ortho-nitro-phényl-b-galactoside à la place du lactose, car l'ortho-machin, si il est dégradé, donnera une coloration jaune (noyau aromatique), donc permetra de visualiser le test.

Dans le test, la bactérie est lysée (on utilise en général de l'eau distillée=cellule éclate) donc elle libère la b-galactosidase:

- si la bactérie a la b-galactosidase, elle hydrolyse l'onpg en onp et donne une coloration jaune: ONPG + , c'est le cas a)
- pas de coloration: pas d'hydrolyse du ONPG donc il n'y a pas la b-galactosidase: ONPG - , c'est le cas b), ou c)


En espérant t'avoir aidé.
Ne pas hésiter à me reprendre si je me suis trompé. C'est qu'alors, faut que je m'y remette!

merci beaucoup, je comprend un peu mieux maintenant!

francoisbailly a écrit:Dans le test, la bactérie est lysée (on utilise en général de l'eau distillée=cellule éclate) donc elle libère la b-galactosidase:

J'ai un doute tout à coup... Ne lis pas vivi ca va te perturber...

J'ai lu plusieurs fois qu'il s'agissait de choc osmotique... et que l'onpg pouvait entrer sans l'intermédiaire de la perméase dans la cellule.

Question bête, aux profs de passage:
lors du test
- la bactérie éclate elle vraiment ici, dans ce cas la b-galactodidase est libérée
- ou alors la membrane est perforée et l'onpg entre, qu'il y ai ou pas de perméase... ?

T. bien pour l'explication de Kligler. François c'est compris!
Effectivement, sur la pente, il y a oxydation du glucose donc peu de déchets acides alors que dans le culot en anaérobiose, la fermentation du glucose produit beaucoup de déchets acides donc, même si le lactose est utilisé ca ne se voit pas. (le virage de l'indicateur ne change pas)

Pour le test ONPG par contre, il n'y a pas de choc osmotique sinon qd on fait des suspensions en eau phy, les cellules seraient détruites! Dans certains cas, c'est ce qu'il se passe mais là c'est le substrat (ONPG) qui pénètre dans la cellule (c'est une substance hydrophobe). Il n'a pas besoin de perméase comme le lactose.

Bon courage pour les révisions


L. Fillaudeau

.

ce mesage n 'a rien à voir avec les milieux
pour demain est ce qu il faut rendre le compte rendu sur la microgalerie

La réponse est OUI pour le CR microgalerie mais je ne le noterai pas puisque le groupe A ne l'a pas fait
Bonne soirée

M.Berthommier a écrit:.

Là vous faites fort quand même !!


::: mod ironie on :::

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::: mod ironie off :::

Jonathan a écrit:

M.Berthommier a écrit:.

Là vous faites fort quand même !!

j'allais dire exactement la même chose!
(je pense quand même que ca signifiait: "point, plus rien à dire!"
=> il y a beaucoup à disserter sur un point...)

Point.

LFILLAUDEAU a écrit:c'est le substrat (ONPG) qui pénètre dans la cellule (c'est une substance hydrophobe). Il n'a pas besoin de perméase comme le lactose.

Je comprends, c'est vrai qu'on s'est servi d'eau phy la dernière fois en TP; et là il n'a pas pu y avoir lyse...

Mais alors pourquoi dans certains cas on fait, toujours avec le ONPG, dans l'eau distillée, si c'est inutile... Pour aider la réaction? (c'est écrit eau distillée dans fiches)

quelqu'un pourait m'expliqer le principe la recherche de la nitrates réductase

alors je vais essayer mais je te promet rien! (je vois qu'il y en a qui on écouter quand je suis passer, )

alors en fait on cherche à savoir si la bactérie possède ou non une nitrate réductase.
pour cela après incubation du bouillon, on ajoute les réactifs de Griess (acide sulfanilique + alphanaphtylamine).
Si dans un premier temps il y a virage du mileu au rouge (en surface, car liquides non miscibles), cela veut dire que la bactérie a réduit les nitrates (NO3-) en nitrites (NO2-): donc NITRATE REDUCTASE +
Si le mileu ne vire pas, on ajoute de la poudre de zinc (c'est un réducteur des nitrates en nitrites).
Si le milieu vire au rouge, cela veut dire que les nitrates on été réduit en nitrites grâce au zinc, mais les nitrates n'avaient pas été réduit précedement (c'est à dire la toute première réaction). La bactérie est donc NITRATE REDUCTASE -
Si au contraire, le milieu reste incolore, cela veut dire que les nitrates ont été réduit directement en diazote (N2) sans passer par le stade nitrites. La bactérie est donc NITRATE REDUCTASE ++

J'espère que je t'es pas trop embrouiller! Bonne révision...

vivi a écrit:Si dans un premier temps il y a virage du mileu au rouge (en surface, car liquides non miscibles), cela veut dire que la bactérie a réduit les nitrates (NO3-) en nitrites (NO2-): donc NITRATE REDUCTASE +

tu veux dire quoi par "parce que liquides non miscibles".

Je pense que les reactifs et le milieu ne sont pas miscibles, ils ne se melangent pas, donc la reaction donnant la coloration rouge se fait principalement en surface.